利用CRISPR-Cas9系统高效创制水稻品系“17318”的 OsGW2、OsGN1a基因定向突变体
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四川省国际科技合作与交流研发项目(2018HH0112);四川省青年科学基金项目(2017JQ0005);中央高校基本科研基 金项目 (ZYGX2016J119、ZYGX2016J122)。


Creation Mutants of OsGW2 and OsGN1a in Rice Cultivar“17318”via CRISPR/Cas9
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    摘要:

    CRISPR-Cas9系统在水稻功能基因的功能研究、性状改良与分子设计育种中起着重要的作用。本研究成功构建了水 稻高效定向敲除OsGW2 和 OsGN1a 的CRISPR/Cas9载体pZJP049。并将该载体通过农杆菌介导转化水稻“17318”愈伤,获 得水稻再生苗。PCR扩增的方法进行转基因植株阳性检测,结果显示阳性率为100%。PCR-RFLP结果表明OsGN1a基因位 点的突变效率为77.7%。 PCR-SSCP检测结果显示OsGW2基因位点突变率为100%。双基因聚合突变体(gw2gw2gn1agn1a)的 种子在长度和宽度均有明显增加,与预期一致。本研究通过CRISPR-Cas9系统快速聚合Gn1a, GW2基因,实现了目标性状 的精确改良。

    Abstract:

    CRISPR-Cas9 has significant influence on gene function research, agronomic traits improvement and molecular design breeding. This research successful constructed highly efficient vector pZJP049 that act as OsGW2 and OsGN1a double gene knockout. And we transformed pZJP049 into“17318”through agrobacterium mediation, obtained transformation. PCR verified positive rate in seedling is 100% . PCR-RFLP showed mutant efficiency at OsGN1a is 77.7%. PCR-SSCP showed mutant efficiency at OsGW2 is 100%. The grain size (the grain length and width) in the double mutant (gw2gw2gn1agn1a) is larger than WT. This research achieved the integration of GN1a and GW2 and precise gene editing by CRISPR-Cas9.

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引用本文

周建平 ,吉琳艺 ,何 瑶 ,郑雪莲 ,罗 樊 ,蔡光泽* ,张 勇*.利用CRISPR-Cas9系统高效创制水稻品系“17318”的 OsGW2、OsGN1a基因定向突变体[J].西昌学院学报(自然科学版),2018,(3):1-5.

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  • 在线发布日期: 2018-10-20